Развитие системы мониторинга изменчивости и контроля качества лабораторной диагностики возбудителей инфекций, передаваемых половым путем

Проведены следующие виды работ:

  • мониторинг изменчивости Neisseria gonorrhoeae и резистентности к применяемым антимикробным препаратам с ведением базы данных по полученным результатам;
  • мониторинг изменчивости Treponema pallidum и резистентности к применяемым антимикробным препаратам с ведением базы данных по полученным результатам;
  • контроль качества лабораторной диагностики сифилиса в лечебно-профилактических учреждениях;
  • хранение и пополнение ранее собранной коллекции штаммов, генетического материала и клинических образцов возбудителей инфекций, передаваемых половым путём

При выполнении работ по мониторингу изменчивости Neisseria gonorrhoeae и резистентности к применяемым антимикробным препаратам с ведением базы данных по полученным результатам проведены следующие мероприятия:

  • осуществлен отбор специализированных учреждений дерматовенерологического профиля субъектов Российской Федерации для участия в выполнении мероприятий программы;
  • обеспечено участие в мероприятиях программы 30 специализированных дерматовенерологических учреждений, что составляет не менее 35% от общего числа специализированных кожно-венерологических диспансеров Российской Федерации;
  • организована методическая помощь и проведено обучение персонала специализированных учреждений стандартным методам выделения, идентификации, консервации и транспортировки N. gonorrhoeae;
  • осуществлено снабжение территорий расходными материалами, необходимыми для выполнения исследований;
  • в специализированных учреждениях субъектов Российской Федерации дерматовенерологического профиля, участвующих в выполнении программы, получено 1474 чистых культуры N. gonorrhoeae, обеспечена их сохранность в условиях низкой температуры; организована транспортировка культур N. gonorrhoeae в лабораторию ФГБУ "Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии";
  • в лаборатории ФГБУ "Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии": получено 1474 чистых культуры N. gonorrhoeae; из общего числа культур N. gonorrhoeae, полученных из учреждений-участников программы, выделено 900 жизнеспособных культур, которые сохранены в условиях низкой температуры; проведены микробиологические и молекулярно-генетические исследования полученных культур N. gonorrhoeae, в том числе определена степень их чувствительности к 7-и антимикробным препаратам (пенициллин, тетрациклин, ципрофлоксацин, цефтриаксон, цефиксим, спектиномицин, азитромицин) путем оценки количественных значений минимальных подавляющих концентраций антибиотиков в отношении Neisseria gonorrhoeae методом серийных разведений в агаре; оценки полученных культур N. gonorrhoeae по результатам por-типирования на основании данных определения нуклеотидной последовательности por гена N. gonorrhoeae, а также по наличию генетических детерминант, определяющих устойчивость к бета-лактамам, фторхинолонам, макролидам, тетрациклинам и спектиномицину;
  • проведены статистическая обработка и сравнительный анализ полученных результатов исследований, проведенных в 2008 году, с данными 2007 года;

В результате проведенных работ установлено:

  • высокий процент штаммов N. gonorrhoeae, не чувствительных к пенициллину (80,4%), в особенности в Уральском (91,6%) Федеральном округе (в остальных Федеральных округах процент не чувствительных к пенициллину штаммов N.gonorrhoeae варьировал в пределах 74-83,2%);
  • высокий процент штаммов N. gonorrhoeae, не чувствительных к тетрациклину (в среднем по Российской Федерации - 85,1%, а в отдельных округах Российской Федерации в пределах 76,8 - 89,9%);
  • высокий процент штаммов N. gonorrhoeae, не чувствительных к ципрофлоксацину (53,9% штаммов N. gonorrhoeae в среднем по Российской Федерации со значительной вариабельностью показателей между Федеральными округами (Урал - 83,3% нечувствительных штаммов, Сибирь - 71,4% нечувствительных штаммов, Южный округ- 34,0% нечувствительных штаммов);
  • снижение чувствительности штаммов N.gonorrhoeaе к спектиномицину в сравнении с данными 2007 года (в 2008 году выявлено 8,5% не чувствительных к спектиномицину штаммов с варьированием показателей в округах Российской Федерации в пределах 6% - 12,6%; в 2007 году процент штаммов N.gonorrhoeaе, не чувствительных к спектиномицину, составило 4,5%;
  • снижение чувствительности штаммов N.gonorrhoeaе к азитромицину в сравнении с данными 2007 года (в 2008 году выявлено 5,5% не чувствительных к азитромициину штаммов с варьированием показателей в округах Российской Федерации в пределах от 0 до 10,1%); в 2007 году процент штаммов N.gonorrhoeaе, не чувствительных к азитромицину, составил 1,3%;
  • отмечен высокоий уровень чувствительности N.gonorrhoeae к цефтриаксону и цефиксиму (100%);
  • выявлена тенденция к формированию устойчивости к цефтриаксону среди гонококков, циркулирующих на территории Российской Федерации.

В результате идентификации генов, ответственных за развитие плазмидных и хромосомных механизмов резистентности N.gonorrhoeae:

  • подтверждена генетическая гетерогенность штаммов N.gonorrhoeae, циркулирующих на территории Российской Федерации с преобладанием серовара PIB (у 90,2% штаммов), ассоциированного с развитием мультирезистентности к АМП;
  • выявлены преобладающие (хромосомные) механизмы развития резистентности N.gonorrhoeae к пенициллину и тетрациклину (мутации в гене ponA у 81,0% штаммов; в гене penA - у 70,6%, в гене rpsJ - у 67,9% штаммов);
  • установлена высокая частота появления мутаций в генах, ответственных за развитие устойчивости к фторхинолонам (в гене gyrA - у 72,9 % штаммов, в гене parC - у 69,3% штаммов, и за эффлюкс антибиотиков из бактериальной клетки (частота мутаций в гене mtr - у 70% штаммов);
  • известные механизмы резистентности N.gonorrhoeae к спектиномицину (мутации в rrs гене) выявлены у 3,1% штаммов N.gonorrhoeae, что свидетельствует о необходимости поиска новых механизмов устойчивости данного препарата;
  • не установлено мутаций в генах rr1; не были также выявлены гены erm и mef, ответственные за развитие устойчивости N.gonorrhoeae к макролидам.

В результате проведенных работ по мониторингу изменчивости Neisseria gonorrhoeae и резистентности к применяемым антимикробным препаратам даны рекомендации по выбору препаратов для лечения гонококковой инфекции на территории Российской Федерации:

  • для лечения гонококковой инфекции на территории Российской Федерации не рекомендовано применение пенициллина, тетрациклина и ципрофлоксацина; в качестве препаратов выбора для лечения гонореи рекомендованы цефтриаксон и цефиксим; азитромицин рекомендован для эмпирической терапии гонореи только в двух округах Российской Федерации: Уральском и Сибирском, где уровень чувствительности к нему N.gonorrhoeae составляет 100%; в остальных Федеральных округах азитромицин может быть применен только под контролем определения чувствительности к нему N.gonorrhoeae; спектинономицин может применяться для лечения гонореи только под контролем определения чувствительности к нему N.gonorrhoeae.

При выполнении работ по проведению мониторинга изменчивости Treponema pallidum и резистентности к применяемым антимикробным препаратам с ведением базы данных по полученным результатам, проведены следующие мероприятия:

  • осуществлен отбор специализированных учреждений дерматовенерологического профиля субъектов Российской Федерации для участия в выполнении мероприятий программы;
  • обеспечено участие в мероприятиях программы 8-и специализированных кожно-венерологических диспансеров Российской Федерации;
  • организована методическая помощь и проведено обучение специалистов учреждений, участвующих в выполнении мероприятий программы, методам получения, идентификации, сохранения и транспортировки биологического материала, содержащего Treponema pallidum;
  • осуществлено снабжение территорий расходными материалами, необходимыми для выполнения исследований;
  • в специализированных учреждениях субъектов Российской Федерации дерматовенерологического профиля, участвующих в выполнении программы, организовано получение 40 клинических образцов, содержащих Treponema pallidum, от больных сифилисом и сывороток крови от тех же больных; обеспечена сохранность образцов биологического материала в условиях низкой температуры и осуществлена их транспортировка из специализированных учреждений субъектов Российской Федерации в ФГБУ "Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии";
  • в ФГБУ "Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии" получено 40 клинических образцов, содержащих Treponema pallidum, от больных сифилисом и сывороток крови от тех же больных; обеспечена сохранность образцов биологического материала в условиях низкой температуры (-80°С); проведены молекулярно-генетические исследования полученного биологического материала, направленные на выявление мутаций в генах устойчивости T. pallidum к антимикробным препаратам, применяемым для лечения сифилиса (бета-лактамам, макролидам и тетрациклинам), у T. pallidum, содержащейся в 40 образцах биологического материала, доставленных из 8-и специализированных дерматовенерологических учреждений субъектов Российской Федерации; проведен сравнительный анализ полученных результатов исследований с данными 2007 года; подготовлены отчетные материалы по итогам выполнения работ по определению антибиотикорезистентности T. рallidum к антимикробным препаратам.

В результате проведенных работ в биологическом материале, содержавшем бледную трепонему, не обнаружено мутаций в генах обусловливающих устойчивость микроорганизма к антимикробным препаратам применяемым при лечении сифилиса: β - лактамным антибиотикам, тетрациклинам и макролидам, что позволило сделать вывод об отсутствии на настоящий момент в Российской Федерации устойчивости возбудителя сифилиса - бледной трепонемы - к данным видам АМП и рекомендовать β - лактамные антибиотики (пенициллин, цефтриаксон), тетрациклин и макролиды для терапии сифилиса в Российской Федерации.

При выполнении работ по контролю качества лабораторной диагностики сифилиса в специализированных лечебно-профилактических учреждениях дерматовенерологического профиля субъектов Российской Федерации проведены следующие мероприятия:

  • осуществлен производственный выпуск контрольных панелей "ЭП Сифилис" в количестве, необходимом для формирования контрольных заданий и их рассылки в 85 специализированных учреждений дерматовенерологического профиля субъектов Российской Федераци; проведена аттестация двух серий контрольных панелей "ЭП Сифилис";
  • на основе произведенных серий контрольных материалов сформированы контрольные задания с целью проведения циклов внешнего контроля качества серологической диагностики сифилиса;
  • проведена рассылка контрольных заданий и сопроводительных документов в 95 специализированных учреждений дерматовенерологического профиля субъектов Российской Федерации; контрольные задания включали посылки с четырьмя контрольными сыворотками, в том числе образцы с разными показателями специфической активности (уровень антител к возбудителю сифилиса) и отрицательные образцы (не содержащие антител к возбудителю сифилиса), в рассылаемом комплекте содержались контрольные образцы двух серий, а также сопроводительные документы;
  • контролируемые учреждения были обеспечены методической литературой; проведено обучение специалистов учреждений правилам выполнения контрольных заданий;
  • в ФГБУ "Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии" были получены ответы на контрольные задания из 85 учреждений специализированных учреждений дерматовенерологического профиля субъектов Российской Федерации и проведен их анализ; проведена статистическая обработка и оценка результатов исследований контрольных материалов, полученных из специализированных учреждений дерматовенерологического профиля субъектов Российской Федерации; проведен сравнительный анализ полученных результатов исследований с данными циклов внешнего контроля качества серологической диагностики сифилиса, полученными в предыдущие годы (2005 - 2007); специализированным учреждениям дерматовенерологического профиля субъектов Федерации, показавшим неудовлетворительные результаты внешнего контроля качества серологической диагностики сифилиса, оказана методическая помощь

В результате проведения цикла внешнего контроля качества серологической диагностики сифилиса в 85 дерматовенерологических учреждениях, проведенного в 2008 году, была подтверждена более высокая диагностическая эффективность лабораторных методов, выявляющих трепонемоспецифические антитела (ИФА, РИФабс/200 и РПГА).

В результате проведенных работ установлено, что в настоящее время на хранении в Коллекции штаммов, генетического материала и клинических образцов возбудителей инфекций, передаваемых половым путём, созданной на базе ФГБУ "Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии", находятся: 3533 культур N. gonorrhoeae, в том числе 1509 рекультивированных культур; 75 образцов биологического материала, содержащего возбудителя сифилиса T. pallidum; биологический материал, содержащий специфические антитрепонемные антитела к возбудителю сифилиса - 1810 образцов сыворотки крови больных сифилисом, охарактеризованных в комплексе регламентированных серологических реакций; клинический материал, содержащий ДНК C. trachomatis - 40 образцов клинического материала, содержащего ДНК C. trachomatis.

Наличие Коллекции штаммов генетического материала и клинических образцов возбудителей инфекций, передаваемых половым путём, позволяет проводить:

  • изучение механизмов антибиотикорезистентности возбудителей ИППП;
  • проведение мониторинга показателей устойчивости микроорганизмов к антимикробным препаратам в одних и тех же регионах Российской Федерации;
  • отслеживание появления новых генотипов возбудителей;
  • изучение молекулярно-эпидемиологических закономерностей распространения ИППП;
  • единый государственный учет патогенных микроорганизмов, вызывающих ИППП;
  • сохранение разрабатываемых в ФГБУ " ГНЦДК Росмедтехнологий" контрольных штаммов возбудителей ИППП.

Представлены следующие отчетные материалы и документы:

  1. Отчет о выполнении работ по изучению изменчивости возбудителей инфекций, передаваемых половым путем (Neisseria gonorrhoeae, Treponema pallidum) и распространения резистентности к применяемым антимикробным препаратам, не менее чем в 30 субъектах Российской Федерации - 1 шт.;
  2. Отчёт по проведению внешнего контроля качества диагностики сифилиса в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений дерматовенерологического профиля не менее чем 85 субъектов Российской Федерации - 1 шт.;
  3. Информационный бюллетень, с анализом данных по состоянию антибиотикорезистентности возбудителей ИППП в 2008 году - 1 шт.;
  4. Сборник стандартных операционных процедур по транспортировке и доставке клинического материала и выделенных культур возбудителя гонореи - 1 шт.;
  5. Сборник стандартных операционных процедур по забору клинического материала у пациентов с подозрением на гонококковую инфекцию -1 шт.;
  6. Сборник стандартных операционных процедур по проведению видовой идентификации возбудителя гонореи -1 шт.;
  7. Сборник стандартных операционных процедур по методам определения чувствительности гонококка к антибактериальным препаратам - 1 шт.;
  8. Сборник стандартных операционных процедур "Стандартизованный способ получения и доставки образцов сыворотки крови больных различными формами сифилиса из субъектов Российской Федерации" - 1 шт.;
  9. Сборник стандартных операционных процедур по определению молекулярно-генетических детерминант штаммов Neisseria gonorrhoeae - 1 шт.;
  10. Базы данных по изученным штаммам Neisseria gonorrhoeae и клиническим изолятам, содержащим Treponema pallidum, включая результаты мониторинга антибиотикорезистентности возбудителей за 2007-2008 годы - 1 шт.;
  11. Отчёт о хранении и пополнении ранее собранной коллекции штаммов, генетического материала и клинических образцов возбудителей инфекций, передаваемых половым путём - 1 шт.
  12. Сборник "Стандартные требования к организации лабораторий, осуществляющих диагностику ИППП"
  13. Учебно-методическое пособие "Стандартизованное выполнение нетрепонемных флоккуляционных серологических тестов при обследовании на сифилис".
  14. Сборник методических разработок лекционного цикла "Серологические методы исследований с целью диагностики сифилиса".